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苦參水提物治療濕疹豚鼠皮膚炎癥的實驗研究

【】2015-07-22 點擊次數
基金項目:廣東省醫學科研基金(編號:A2014706);廣東省中醫藥局建設中醫藥強省立項資助項目(編號:20141007);廣東省醫院藥學研究基金(奧賽康基金)(編號:2015A02);佛山市醫學類科技攻關項目(編號:201308122)
陳 燕:廣東省第二人民醫院 廣東廣州 510317
張麗華:佛山科學技術學院組胚教研室 廣東佛山 528000

苦參水提物治療濕疹豚鼠皮膚炎癥的實驗研究

陳 燕 張麗華
EFFECTS OF SOPHORA FLAVESCENS EXTRACT ON SKIN INFLAMMATIONS OF GUINEA PIGS WITH ECZEMA
CHEN Yan, ZHANG Lihua 


  【摘 要】 目的 通過分析苦參水提物對濕疹豚鼠皮膚炎癥腫脹度的抑制作用,并觀察病理變化,探討其抗炎作用,為臨床治療提供實驗依據。方法 豚鼠40只,用2,4-二硝基氯苯在豚鼠頸背部涂抹致敏,在右耳內側激發造模。隨機分成5組,每組8只,分別作為模型對照組、陽性對照組、苦參提取液高、中、低濃度組,對濕疹部位皮膚連續涂抹給藥14天,取雙耳等面積的同部位,以左、右耳重量之差來評價皮膚炎癥腫脹度。并取右耳組織塊,HE常規染色,制作組織病理切片,觀察其病理變化。結果 與模型對照組相比,苦參水提物高、中濃度組豚鼠皮膚腫脹度明顯減輕 (p<0.05),且真皮水腫和炎性細胞浸潤情況明顯改善(p<005);與陽性對照組比較,苦參水提物高濃度組的豚鼠皮膚腫脹度、真皮水腫和炎性細胞浸潤情況亦明顯減輕(p<0.05) 。結論 苦參水提物能有效減少濕疹豚鼠皮膚的炎癥反應,對于開拓濕疹的臨床治療方法具有一定的研究意義。
  【關鍵詞】 苦參,濕疹,腫脹度,水提物,抗炎作用

  【Abstract】 Objective To investigate the inhibition of Sophora flavescens extract on the degree of inflammatory swelling of guinea pigs' skin with eczema, observe pathological changes and explore the effects of the anti-inflammatory action, in order to provide experimental basis for clinical treatment. Methods Eczema models of 40 guinea pigs were set up by smearing 2, 4-dinitrochlorobenzene on their napes to cause sensitization and motivating in the inside of their right ears. All guinea pigs were randomly divided into 5 groups equally,including the model compared group, positive control group and high, medium, low concentration groups of sophora flavescens. After eczema skin was continuously administered drugs for 14 days, the same part with equal area of the left and right ears was taken and weighed. The difference between the left and right ears was used to evaluate the swelling degree of skin inflammation. The pathological changes were observed by making pathological slices with HE staining with the tissue blocks of right ears. Results Compared with the model group, the swelling degree of skin inflammation was significantly relieved and dermal edema and inflammatory cell infiltrating were significantly improved in the high and medium concentration groups of sophora flavescens (p<0.05). Compared with the positive group, the swelling degree of skin inflammation, dermal edema and inflammatory cell infiltrating were significantly alleviated in the high concentration group of sophora flavescens (p<0.05). Conclusion Sophora flavescens extract can effectively reduce inflammatory response of guinea pigs' skin with eczema, having a certain significance for the clinical treatment of eczema.
     【Key words】  Sophora flavescens, Eczema, Swelling, Aqueous extract, Anti-inflammatory effect
     【Author′s address】 Guangdong NO.2 Provincial People's Hospital, Guangzhou 510317, Guangdong Province, China
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.05.008

  濕疹是一種由各種內外因素引起的過敏性炎癥性皮膚病,臨床上以皮膚丘疹、水皰、滲出、糜爛為主,呈多形性改變,易反復發病。其組織學特征為表皮細胞間水腫,伴有不同程度的棘層肥厚及淺表血管周圍淋巴組織細胞浸潤[1]。癥見自覺性皮膚瘙癢,易引起睡眠紊亂,嚴重影響生活質量。目前濕疹治療主要以糖皮質激素藥物為主,需長期用藥,不良反應較大[2]。近年來,中醫藥治療對濕疹具有相當重要的作用,其療效顯著,不良反應少,受到皮膚科醫生的重視[3]。
     苦參(Sophora Flavescens)是豆科植物苦參的根,含苦參堿、氧化苦參堿、槐花醇、金雀花堿等多種生物堿,具有抑菌、抗炎、抗過敏、調節免疫等多種藥理作用[4-5],主要用于治療濕疹、瘙癢癥等風熱、濕熱之皮膚病等病癥,在治療各種以變態反應為特征的皮膚炎癥性疾病中取得較為明顯的療效[6-7]。因其具有清熱燥濕、止癢安神的功效而歷來為中醫治療皮膚病所推崇。本實驗主要探討苦參水提物對濕疹豚鼠皮膚炎癥的影響,并觀察皮膚腫脹度改變情況及其病理變化情況。
     1 材料與方法
1.1 實驗動物
     純白短毛豚鼠,雄性,體重(250±20)g,由廣東省實驗動物中心提供,實驗動物合格證號:SCXK(粵)2013-0002。
1.2 儀器
     電子天平,BS-600L,友聲衡器有限公司生產; 金屬打孔器(6 mm),廣州正宏醫療器械設備有限公司。
1.3 藥品及試劑
     苦參(杏林藥業有限公司,20131203);復方醋酸地塞米松乳膏(東康藥業有限公司,批號:130909);2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene ,DNCB)(上海試劑一廠,批號890901);丙酮(AR,大茂化學試劑廠)。
1.4 方法
1.4.1 藥物的制備 苦參水提物的制備:苦參飲片1 kg,加 5 倍水,浸泡 2 h,煎煮 1 h,過濾,藥渣再加 3 倍水煎煮30 min,過濾,合并濾液濃縮至含生藥5 g/ml。取適量含生藥5 g/ml的苦參水提物,用純水適當稀釋,分別得到含生藥2.5 g/ml,1.25 g/ml的苦參水提物。最后經熱壓滅菌后冷藏保存留用。
     致敏劑及激發溶液的制備:精密稱取DNCB 2.5 g,用丙酮溶解,并定容到50 ml容量瓶中,制成5%的DNCB致敏溶液。取0.5%的DNCB致敏溶液1 ml,用丙酮稀釋并定容到50 ml容量瓶中,制得0.1% DNCB激發溶液。
1.4.2 豚鼠濕疹模型的建立 建立40只豚鼠慢性濕疹模型。每只豚鼠頸背部剪毛2 cm×2 cm大小,5%DNCB溶液25 μl外涂致敏。2周后.每只豚鼠右耳內側涂0.1%DNCB溶液100 μl作為激發。每周1次,連續4次。
1.4.3 實驗分組、給藥與取材 將濕疹模型豚鼠隨機分為A、B、C、D、E五組,每組8只。于第4次激發72 h后,對上述各組進行濕疹部位皮膚涂抹給藥治療,每日2次。A組為模型對照組,給予生理鹽水;B組為陽性對照組,按說明書給予復方醋酸地塞米松乳膏;C、D、E組分別為苦參水提物高、中、低濃度組,含苦參生藥濃度分別為500 g/ml、2.50 g/ml和1.25 g/ml,分別按20、10和0.5 g/kg給藥。各組均連續給藥14天,隨后停藥1天,用直徑6 mm的打孔器切下雙耳等面積的同部位,精密天平稱重。
1.4.4 觀察指標
1.4.4.1 腫脹度和腫脹抑制率 以左、右耳片重量之差作為皮膚炎癥腫脹程度評價指標,按下式計算各組腫脹度,并求出腫脹抑制率(%)。
     腫脹度= 炎癥皮膚重量(右耳)-健康皮膚重量(左耳)
     抑制率(%) =(模型對照組腫脹度-藥物組腫脹度)/ 模型對照組腫脹度 ×100%。
1.4.4.2 病理變化 用4%多聚甲醛固定右耳組織塊,HE常規染色,制作組織病理切片,光鏡下觀察各組的病理變化。
1.4.5 統計學處理 用SPSS 13.0軟件進行統計分析,數據用均數±標準差表示,多組之間的比較采用方差分析,p<005為差異具有統計學意義。
2 結果
2.1 豚鼠慢性濕疹模型
     0.1%DNCB溶液第一次激發48小時后,右耳廓開始出現腫脹,與未激發的左耳相比,有明顯區別,第二次、第三次激發后,腫脹增厚進一步加劇,并出現少許脫屑;第4次激發后右耳腫脹、增厚明顯,表面出現結痂,與人慢性濕疹的臨床表現相近似,表明造模成功。
2.2 腫脹度及腫脹抑制率
     與模型對照組相比,苦參水提物高、中濃度組豚鼠皮膚腫脹度明顯減輕,差異有統計學意義 ( p<0.05) ,與陽性對照組比較,苦參水提物高濃度組的豚鼠皮膚腫脹度明顯減輕,差異有統計學意義 (p<0.05) 。結果見表1。

表1 苦參水提物對2,4-二硝基氯苯所致豚鼠皮膚腫脹的影響

(±s,n=8)

組別 藥物 腫脹度/mg 抑制率/%
模型對照組(A) 生理鹽水 45.82±9.47 -
陽性對照組(B) 復方醋酸地塞米松乳膏 28.46±3.281) 37.89
高濃度組(C) 苦參水提物高濃度組(500 g/ml) 19.92±4.201)2) 56.52
中濃度組(D) 苦參水提物高濃度組(2.50 g/ml) 27.33±5.171) 40.35
低濃度組(E) 苦參水提物高濃度組(1.25 g/ml) 35.15±7.33 23.29
 注: 各組與模型對照組比較,1)p<0. 05;與陽性對照組比較,2)p<0. 05
2.3 病理切片觀察結果
     模型對照組:組織被覆復鱗狀上皮,表面可見厚層角化物,上皮表層角化不全或角化過度,顆粒層、棘層增厚,真皮水腫伴炎細胞浸潤,符合皮膚濕疹改變,表明濕疹模型造模成功;高濃度組、中濃度組及陽性對照組病理切片可見:真皮水腫消退,炎性細胞浸潤明顯減少,尤其是高濃度組真皮內炎癥改善最明顯(p<0. 05);與模型對照組相比,低濃度組真皮水腫及炎性細胞浸潤改善不明顯(p>0. 05)。
     3 討論
     治療濕疹目前常用的藥物有皮質類固醇激素、組胺拮抗類、鈣劑、維生素等,它們控制濕疹癥狀效果良好,但停藥后易復發,且不良反應較多。苦參及其總生物堿治療急性、亞急性濕疹用藥安全,無抗組胺藥物的嗜睡及皮質激素的不良反應,具有廣闊的開發前景[4]。苦參性味苦、寒,歸心、肝、胃、大腸、膀胱經,具有清熱燥濕、祛風殺蟲止癢之功效,歷來為中醫治療皮膚病所推崇。其有效成分苦參堿和氧化苦參堿,易溶于水,是苦參水提物的主要成分,具有抗炎作用,可降低過敏介質的釋放,具有免疫抑制作用[8-9],還能殺滅和抑制體表多種細菌和真菌生長[10],還可誘導視網膜母細胞瘤細胞SM-106凋亡[11],具有抗腫瘤作用,與順鉑聯合使用,在增加抑瘤作用的同時,可適度減少順鉑的副作用[12],肝癌肝動脈化療栓塞后使用苦參素能明顯改善患者肝功能及免疫功能[13],故現在臨床中亦用于腫瘤、惡性胸腔積液[14-15]等。
     現階段研究關于濕疹的報道卻多見于療效報道,本實驗利用經典的豚鼠濕疹模型對苦參水提物抗濕疹藥理作用進行了評價。與模型對照組相比,苦參水提物高、中濃度組豚鼠皮膚腫脹度明顯減輕(p<0.05),且真皮水腫和炎性細胞浸潤情況明顯改善(p<0.05),與陽性對照組比較,苦參水提物高濃度組的豚鼠皮膚腫脹度、真皮水腫和炎性細胞浸潤情況亦明顯減輕(p<0.05),其效果優于復方醋酸地塞米松乳膏。因此,苦參水提物對豚鼠濕疹模型有明顯的改善作用,值得進一步深入研究,為以后開發采用中藥苦參治療濕疹的外用制劑提供依據。

參考文獻
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