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大鼠脂肪間充質干細胞與殼聚糖支架體外聯合培養

【】2016-11-13 點擊次數

【作者】 何黎明; 劉保國; 雷粵彬; 姚晨; 肖罡;

【機構】 粵北人民醫院; 乳源縣瑤族自治縣人民醫院;

【摘要】 目的采用大鼠脂肪間充質干細胞與殼聚糖支架體外聯合培養為顱腦損傷大鼠模型神經修復提供種子細胞。方法取SD大鼠附睪周圍脂肪組織,分離培養脂肪間充質干細胞,傳至第3代流式細胞儀檢測細胞表面標記CD29、CD90、CD44表達;凍干燥法制備殼聚糖支架材料,再取第5代細胞以2×106/m L的密度接種于殼聚糖三維支架上,促進其向神經元和膠質細胞方向分化;免疫熒光染色鑒定細胞分化結果。結果分離培養的脂肪間充質干細胞表面標記CD29、CD90、CD44陽性表達率分別為91.05%、92.76%、96.56%,達到理想的純度;制備的殼聚糖三維支架具有合適的三維多孔結構;培養基誘導7 d左右可見檢測神經細胞特異性標志(巢蛋白和β-tubulinⅢ)的表達,分化后的大部分細胞呈現典型的神經元樣改變,細胞伸出細長突起或網狀突起,可見較多的細胞形成網絡連接。免疫熒光染色鑒定結果證實,神經球高表達巢蛋白(Nestin)陽性率(65.23±0.98)%,分化細胞β-tubulinⅢ陽性率(62.35±5.71)%,微管相關蛋白2(MAP2ab)陽性率(12.87±2.63)%。結論大鼠脂肪間充質干細胞聯合殼聚糖支架培養可在體外培養得到較高比例神經細胞特異性標志的Nestin及β-tubulinⅢ陽性細胞,并有一定比例MAP2ab陽性細胞出現,該特異性標志表達的細胞用于大鼠顱腦外傷模型神經修復實驗。

【關鍵詞】 大鼠脂肪源間充質干細胞; 分離; 培養; 殼聚糖;

【基金】 韶關市科技局項目(編號:2013CX/K13)

【所屬期刊欄目】 專業技術篇_實驗與應用研究 (2016年06期)

【鏈接】 中國知網   萬方醫學網

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