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ICU多重耐藥鮑曼不動桿菌的同源性分析

【】2015-07-23 點擊次數
基金項目:廣州市衛生局醫藥衛生科技項目(編號:20141A010051)
林云萬 梁穎茹 賀 征 李 燕 張 旭 魏躍紅:廣州市疾病預防控制中心 廣東廣州 510440

ICU多重耐藥鮑曼不動桿菌的同源性分析


林云萬 梁穎茹 賀 征 李 燕 張 旭 魏躍紅
HOMOLOGY ANALYSIS OF MULTIDRUG-RESISTANT ACINETOBACTER BAUMANNII IN ICU 
LIN Yunwan, LIANG Yinru, HE Zheng, et al


  【摘 要】 目的 分析某院重癥監護室(ICU)多重耐藥鮑曼不動桿菌(MDRAB)的耐藥性和同源性。方法 11株MDRAB在同一時期分離自ICU患者痰標本、環境物品和醫務人員手。運用VITEK 2 Compact 進行抗菌藥物敏感試驗(MIC),脈沖場凝膠電泳(PFGE)分析菌株的同源性。結果 對左氟沙星的耐藥率最低(54.5%),其次為哌拉西林/他唑巴坦(81.8%),對其他17種抗菌藥物的耐藥率均很高(90.9%~100%)。PFGE共分為A、B、C、D 4個型,其中A型為主要流行克隆株。結論 該院ICU分離的MDRAB 對臨床常用的抗生素耐藥性嚴重。患者間存在A型MDRAB克隆株的交叉感染。
  【關鍵詞】 鮑曼不動桿菌,脈沖場凝膠電泳,同源性

  【Abstract】 Objective To investigate the drug resistance and the homology of multidrug-resistant Acinetobacter baumannii (MDRAB) isolated from an intensive care unit (ICU). Methods Eleven strains of MDRAB were isolated from ICU at the same time. The antimicrobial susceptibility were determined by using the Vitek-2 Compact System, and the homology of the strains was analyzed by PFGE.Results All the MDRAB isolates were showed high resistant to seventeen antimicrobial compounds (90.9% to 100%). 54.5% of the MDRAB isolates were resistant to ciprofloxacin, and 81.8% of the MDRAB isolates were resistant to piperacillin/tazo-bactam. Eleven MDRAB strains were classified into 4 types based on PFGE pulsotypes, named type A,B,C and D.Isolates of type A were the main epidemic strains. Conclusion The drug resistance rate of MDRAB isolated from ICU is high. There has been clonal spread of type A stains among patients.
     【Key words】  Acinetobacter baumannii, Pulsed field gel electrophoresis(PFGE), Homology
     【Author′s address】 Guangzhou Center for Disease Control and Prevention, Guangzhou, Guangdong, 510440,China
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.06.038

  由于廣譜抗菌藥物的廣泛使用及侵入性治療技術的不斷開展,鮑曼不動桿菌近年來成為我國引起院內感染的重要多重耐藥菌,被稱為革蘭氏陰性桿菌中的 “MRSA”,尤其在重癥監護室(ICU)的檢出率呈現逐年升高的趨勢。本實驗通過PFGE 方法對某院ICU分離的11株MDRAB進行同源性分析,旨在了解MDRAB醫院內感染的分子機制,明確感染源頭及感染途徑,為盡早發現及控制醫院感染和臨床防治提供依據。
     1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 菌株來源 分離自某院ICU 5床和8床感染患者痰標本2株,同期ICU環境中的床欄、記錄臺、儀器按鈕、電腦鍵盤、門把手和醫務人員手樣本分離出9株。
1.1.2 主要試劑 VITEK2-COMPACT全自動微生物生化分析系統細菌鑒定卡及AST-GN09藥敏卡,藥敏卡包括氨芐西林、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林等19種臨床常用抗生素;PFGE使用膠為BIO-RAD公司的瓊脂糖膠;Tris、EDTA 等生化試劑為上海生工生物工程技術服務有限公司產品。
1.1.3 主要儀器 VITEK2-COMPACT全自動微生物分析系統;Bio-rad CHEF Map-perTM脈沖場凝膠電泳儀、Bio-rad紫外線投射凝膠成像系統。
1.2  方法
1.2.1 細菌鑒定和藥敏試驗 使用VITEK2-COMPACT全自動微生物生化分析系統進行細菌鑒定及抗菌藥物敏感試驗(MIC法),以大腸埃希菌ATCC25922 、銅綠假單胞菌ATCC27853為標準進行質量控制,藥物敏感試驗結果按CLSL2012標準判定[1]。
1.2.2 脈沖場凝膠電泳(PFGE) 將培養過夜的純菌落配制成細菌懸浮液,用低熔點瓊脂膠進行包被,蛋白酶K 消化24 h。限制性內切酶ApaI37℃酶切24 h。用0.5×TBE 緩沖液配制1% SeaKem Gold 瓊脂糖膠,加熱溶解后冷卻至55 ℃,緩緩倒入模具中,放置30 min。電泳條件設置:電壓6V/cm,脈沖參數5~20 s,溫度14 ℃,夾角120°,電泳時間20 h。電流結束,EB 染色后成像。PFGE 結果判讀按美國疾病控制和預防中心TENOVER等[2]推薦的方法判讀,酶切后圖譜完全一致定為同一型,有1~3個條帶不同者為同一型的不同亞型,差異3個條帶以上者為另一型。
2 結果
2.1 藥敏試驗結果
     11株MDRAB對臨床常用抗菌藥物的耐藥性嚴重,對左氟沙星的耐藥率最低(54.5%),其次為哌拉西林/他唑巴坦(818%),對其他17種抗菌藥物的耐藥率均很高(90.9%~100%),見表1。

表1 多重耐藥鮑曼不動桿菌對19種抗菌藥物的耐藥情況

 


藥物
菌株
  1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
氨芐西林 R R R R R R R R R R R
氨芐西林/舒巴坦 R R R R R R R R R R R
哌拉西林 R R R R R R R R R R R
哌拉西林/他唑巴坦 R R R R R R R R I I R
頭孢唑啉 R R R R R R R R R R R
頭孢呋辛 R R R R R R R R R R R
頭孢呋辛酯 R R R R R R R R R R R
頭孢替坦 R R R R R R R R R R R
頭孢他啶 R R R R R R R R R R R
頭孢曲松 R R R R R R R R R R R
頭孢吡肟 R R R R R R R R R R S
氨曲南 R R R R R R R R R R R
亞胺培南 R R R R R R R R S R R
慶大霉素 R R R R R R R R R R R
妥布霉素 R R R R R R R R R I R
環丙沙星 R R R R R R R R R R R
左氟沙星 R R R R R I R I I I S
呋喃妥因 R R R R R R R R R R R
復方新諾明 R R R R R R R R R S R
 注:R:耐藥;I:中介;S:敏感
  數字1~10分別代表5床患者、5床床欄、5床儀器按鈕、8床患者、8床床欄、12床記錄臺、移動推車、某護士手、公用電腦鼠標、門把手、10床記錄臺分離的MDRAB。
2.2 PFGE同源性分析
     采用PFGE對11株MDRAB進行同源性分析的結果顯示, 共分4個PFGE型, 分別命名為A~D。其中A 型包括5床感染患者、5床床欄、5床儀器按鈕、8床感染患者、8床床欄、12床記錄臺、移動推車和某護士手分離株;公用電腦鼠標分離株為B型;門把手分離株為C型;10床記錄臺分離株為D型。見圖1。

圖1 多重耐藥鮑曼不動桿菌PFGE分型圖譜

注:M為標準帶;數字所代表菌株同表1
3 討論
     鮑曼不動桿菌由BEIJERINCK于1911年發現后,直到上世紀70年代,對絕大多數抗菌藥物都敏感,隨著臨床上廣譜抗生素的濫用和抗生素選擇性壓力的不斷增加,鮑曼不動桿菌耐藥情況日趨嚴重。11株MDRAB對臨床常用抗菌藥物的耐藥性嚴重,對青霉素類、頭孢菌素類、碳青霉烯類、氨基糖苷類、呋喃類耐藥率很高,絕大部分達到100%,達到一個很高的水平。鮑曼不動桿菌耐藥譜非常廣泛,具有多種耐藥機制:①產生多種β-內酰胺酶,使β-內酰胺藥物失去活性而耐藥。②細胞膜孔蛋白缺失、主動外排系統編碼基因缺失,導致鮑曼不動桿菌細胞內藥物濃度不足而耐藥。③可同時產生多種耐藥質粒,導致對多種類型的抗菌藥物表現交叉耐藥和多藥耐藥的特點。④整合子的基因傳播能力、主動外排機制介導以及細菌生物膜對抗菌藥物的阻擋也是MDRAB多藥耐藥性的重要原因[3-6]。正是由于鮑曼不動桿菌具有上列耐藥機制,使其形成多重耐藥且耐藥性快速上升的原因所在,同時,也由于耐藥株更適應于在抗生素廣泛使用環境下的選擇性生存,多重耐藥甚至泛耐藥菌株分離率不斷上升,容易導致醫院感染的暴發和流行。
     MDRAB因其對抗菌藥物的高度耐藥常常導致臨床抗感染治療的失敗,MDRAB的水平傳播給醫院的感染控制工作帶來挑戰[7]。2009~2010年中國CHINET細菌耐藥監測資料[8-9]顯示: 鮑曼不動桿菌院內感染已列第4 位,成為僅次于銅綠假單胞菌的重要非發酵菌。因此,分析MDRAB的分子流行特征,檢測不同菌株間的同源相關性,對了解感染的源頭,探尋MDRAB在醫院內的水平傳播途徑以及控制多重耐藥菌株的播散具有重要意義。PFGE以其重復性好,分辨力強而被譽為細菌分子生物學分型技術的“金標準”。本研究采用PFGE技術對11株MDRAB進行基因分型,共分4個型,命名為A~D型。其中A型有8株菌,包括5床患者及床單元內的床欄和儀器按鈕、8床患者及床欄、12床記錄臺、移動推車、某護士手。從PFGE結果可知,5床患者與8床患者為同一基因型,結合臨床資料,8床患者為ICU長期住院病人,并感染有MDRAB,5床患者后入院并于一段時間后發生MDRAB院內感染,同時,兩株菌對19種常用抗生素的耐藥表型完全一致,皆為耐藥,依此可判斷,5床患者與8床患者為同一株MDRAB引起的交叉感染,該院ICU存在A 型克隆株的播散流行;ICU環境存在A型MDRAB的廣泛定值,特別是感染患者的床單元內物品,諸如床欄、儀器按鈕等定值情況最為嚴重,同時ICU也存在B型、C型和D型菌株的定值;某護士手中分離出A型菌株,環境中MDRAB定值最廣泛的地方皆為手接觸頻繁的物品,說明手的接觸傳播在該菌的流行中起著不可忽視的作用,正因為手的傳播作用,克隆株進一步在環境中擴散定值,并引起院內感染的發生,8床患者的MDRAB感染,極可能是受污染的醫務人員手接觸傳播所致。
     綜上所述,該院ICU存在A型MDRAB克隆株的院內感染,耐藥菌在環境物品表面的定值情況比較嚴重,需引起醫務工作者的高度重視。切斷耐藥株的傳播,ICU 醫務人員應迫切做好病房的消毒隔離,同時加強感染控制措施,如勤洗手、規范無菌操作、合理使用抗菌藥物等[10]。此外,院內必須重視和開展細菌耐藥性監測工作,進行同源性分析,追蹤感染源,及時切斷耐藥克隆株的傳播,以避免院內感染的大規模暴發。

參考文獻
[1] CLINICAL AND LABORATORY STANDARDS INSTITUTE. Performance standards for anti-microbial susceptibility testing. Twentysecond informational supplement[S].CLSI,M100-S22,2012,32(3):1-80.
[2] TENOVER FC,ARBEIT RD,GOERING RV,et al. Interpreting chromosomal DNA restriction patterns produced by pulsed-field gel electrophoresis:criteria for bacterial strain typing[J].J Clin Microbiol,1995,33(9):2233-2239.
[3] 王衛華,陳 潔,李春仙,等.泛耐藥鮑氏不動桿菌β-內酰胺酶、膜孔蛋白、外排泵編碼基因研究[J].中華醫院感染學雜志,2012,22(10):2001-2004.
[4] 魯海強,劉達恩.鮑氏不動桿菌生物膜的研究進展[J].中華醫院感染學雜志,2012,22(23):5428-5430.
[5] 丁 慧. 鮑曼不動桿菌耐藥性分析及其主動外排基因adeB的分子檢測[J].實用預防醫學,2013,20(6):746-748.
[6] 黃育波,張天托,朱家馨,等.醫院獲得性肺炎患者醋酸鈣-鮑曼不動桿菌復合體的鑒定和耐藥基因研究[J].實用醫學雜志,2015,31(3):476-481.
[7] KEMPF M, ROLAIN JM. Emergence of resistance to carbapenems in Acinetobacter baumannii in Europe:clinical impact and therapeutic options[J]. Int J Antimicrob Agents, 2012, 39(2): 105-114.
[8] 張小江,徐英春,俞云松,等.2009 年中國CHINET 鮑曼不動桿菌細菌耐藥性監測[J].中國感染與化療雜志,2010,10(6):441-446.
[9] 朱德妹,汪 復,胡付品,等.2010年中國CHINET細菌耐藥性監測[J].中國感染與化療雜志,2011,11(5):321-329.
[10] 余 琳,蘇丹虹,江鳳茹,等.多重耐藥鮑曼不動桿菌耐藥基因分析與同源性分析[J].實用醫學雜志,2013,29(12):2018-2021.

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