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2014年佛山市三水區麻疹疑似病例檢測結果分析

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許 娟 余小慶:佛山市三水區疾病預防控制中心 廣東佛山 528100
張俊國:廣東藥學院公共衛生學院2013級研究生 廣東廣州 510310

2014年佛山市三水區麻疹疑似病例檢測結果分析


許 娟 張俊國 余小慶
ANALYSIS OF DETECTION RESULTS OF SUSPICIOUS MEASLES CASES IN 2014 SANSHUI, FOSHAN
XU Juan, ZHANG Junguo, YU Xiaoqing


  【摘 要】 目的 分析三水區麻疹流行特點,為本區麻疹監測工作的順利、有效開展提供科學依據。方法 收集2014年全區88例疑似麻疹患者標本,采用ELISA法檢測麻疹病毒IgM抗體;實時熒光定量PCR法檢測病毒核酸,將結果匯總分析。結果 麻疹病毒IgM抗體檢測陽性率7176%,鼻咽拭子核酸檢測陽性率8750%,二者差異具有統計學意義(P<005);7月為麻疹發病高峰期;陽性病例集中在0~2歲和21~40歲;本地與外地人口麻疹陽性檢出率差異有統計學意義(P<005);不同采樣時間,鼻咽拭子核酸檢測陽性率差異沒有統計學意義(P>005),IgM抗體陽性檢出率差異具有統計學意義(P<005)。結論 熒光定量PCR檢測麻疹病毒核酸可以彌補出疹早期(<3 d)麻疹IgM抗體滴度過低導致血清ELISA法漏檢的不足。
  【關鍵詞】 麻疹,ELISA,熒光定量PCR,檢測

  【Abstract】 Objective To analyze features of measles prevailing in Sanshui and provide a scientific basis for local monitoring measles. Methods 88 suspected measles patients in the whole district in 2014 were collected. ELISA was employed to test IgM antibody of the measles virus and real-time fluorescent quantitative PCR method was utilized to detect virus nucleic acid. At last, the results were analyzed. Results Measles virus of IgM antibody of positive rate was 71.76% and that of nucleic acid detection on a nasopharyngeal swab was 87.50%, with statistically significant difference (P<005). July was the peak period of incidence of measles. Positive cases mainly occurred in people from 0 to 2 years old and 21-40 years old. The difference of positive detection rate of measles between local and migrants was statistically significant (P<005). Nasal swabs nucleic acid testing at varying time was not (P>005), while that of IgM antibody possessed statistical significance (P<005). Conclusion Real-time fluorescence quantitative PCR detection of measles virus nucleic acid can make up for ELISA method of deficient serum detection led by low IgM antibody titers in early-period measles (<3 days).
     【Key words】  Measles, ELISA, Real-time fluorescence quantitative PCR, Test
     【Author′s address】 Sanshui center for disease control and prevention of foshan city, Foshan, Guangdong, 528100 PRC
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.11.057 

  麻疹是由麻疹病毒引起的一種以發熱、呼吸道卡他和遍及全身斑丘疹為特征的急性病毒性傳染病,是兒童最常見的急性傳染病,其傳染性很強[1],如果接觸了該病毒,幾乎所有未接受免疫接種的兒童、或沒有通過罹患該病獲得免疫力的人均可受到感染。自2012年下半年來,我省麻疹疫情呈上升趨勢,三水區2014年全區報告的麻疹病例數比去年增長8倍,為科學地分析現階段麻疹流行因素,探索麻疹發病原因,現將三水區2014年麻疹疑似病例患者的實驗室檢測結果分析如下。
     1 材料與方法
1.1 材料
     采集本區2014年報告的疑似麻疹病例血清學標本和鼻咽拭子標本。血清標本由病例報告單位在規定時間內按照標準方法采集全血標本,分離血清與送檢單一起及時送檢,溶血、脂血不合格應重采;鼻咽拭子標本由區疾控中心采集,保存于病毒運輸液(HBSS或MEM,Invitrogen)及時送檢至三水區疾控中心病原微生物實驗室。
1.2 檢測方法
1.2.1 PCR方法 血清學標本采用海泰生物制藥有限公司生產的麻疹病毒IgM抗體診斷試劑盒(酶聯免疫捕捉法)測定IgM抗體;鼻咽拭子病毒標本采用Ambion公司生產的MagMAXTM-96 Viral RNA Isolation Kit提取核酸后,使用碩世生物科技有限公司的麻疹病毒核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)檢測病毒核酸。制備RNA時,取出儲存于超低溫冰箱麻疹鼻咽拭子病毒標本,不可先行解凍,加入液氮研磨,以避免RNase。開關EP管時雙手操作,盡量以最小的面積接觸EP管上方,手不能觸及管蓋的內面。取5 μL麻疹病毒的RNA提取物作為模板,反應條件為50 ℃逆轉錄30 min,94 ℃變性4 min后,進行PCR循環,94 ℃ 45 s,56 ℃ 45 s,72 ℃ 1 min,35個循環后,72 ℃延伸10 min,反應結束時儀器自動分析結果,所有試劑均經過驗收合格后并且在有效期內使用。減少其他因素影響PCR檢測方法的準確性,應注意:反應液、引物等試劑在開蓋前要瞬離,使冠蓋和管壁的的液體沉于管底,同時盡量減少試劑的開蓋次數,以防濺沫、空氣等污染試劑,在加入Tap后要吹打混勻反應液。CR試劑、反應液與樣品及PCR產物不要放于同一冰箱。PCR管加蓋平蓋時,不要裸手觸摸光蓋表面,在結果判定前進行非扣除本底曲線分析。電泳上樣時,禁止點樣孔內有氣泡和加樣液的溢出,以免PCR產物漂移到其他孔而影響檢測結果。凝膠電泳后的溴化乙錠溶液染色,之后觀察電泳帶及其位置,并與Marker核酸分子量標準比較被擴增產物的大小。
1.2.2 PCR質控 ①嚴格按照試劑盒說明書進行操作;②為確保準確性,進行多次測量取平均值;③操作時穿戴無菌隔離衣以及手套口罩,避免造成樣本受污染,導致結果不夠準確等。
1.3 統計學方法
     采用SPSS 210進行統計處理,用2檢驗及Fisher確切概率法,P<005為差異有統計學意義。2 結果
2.1 基本情況
     2014年三水區全年共檢測疑似麻疹病例88例,經實驗室確診陽性的72例,陽性率為8181%。男性檢出陽性率8214%(46/56);女性檢出陽性率8125%(26/32),男女麻疹檢出陽性率差異無統計學意義(2=0011,P=0917)。其中靜脈血IgM抗體檢測陽性率為7176%(61/85),鼻咽拭子麻疹病毒核酸檢測陽性率為8750%(70/80),二者檢測陽性率差異具有統計學意義(2=6237,P=0012)。
2.2 麻疹病例時間分布情況
     除1、3、11和12月未檢出外,其他各月份均檢出麻疹病例。主要集中于5~8月、7月為麻疹發病高峰期(見表1)
2.3 年齡分布情況
     72例確證麻疹的患者中各年齡段均有發病,其中最小年齡為2月齡,最大年齡49歲,各年齡組麻疹檢測情況詳見表2。采用Fisher確切概率法檢驗顯示,不同年齡組別麻疹檢出陽性率存在差異(P=0004)。
2.4 居住分布情況
     88例麻疹疑似病例標本中,居住在本縣區內人口檢出陽性率為7358%(39/53);居住在本縣區外人口檢出陽性率9429%(33/35);經卡方檢驗,二者陽性檢出率差異具有統計學意義( 2=6072,P=0014)。
2.5 采樣時間與檢出陽性率之間的關系
     按照采樣距出疹天數不同,將麻疹疑似病例分為:發熱出疹后<3,3~6天及>6 d,檢測結果見表3。采用Fisher確切概率法檢驗,結果顯示不同采樣時間血清IgM抗體檢測陽性率差異具有統計學意義(P=0009),鼻咽拭子核酸檢測陽性率差異無統計學意義(P=1000)。

表1 三水區2014年麻疹病例時間分布

 

月份 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 合計
陽性數/n 0 2 0 3 9 18 24 11 4 1 0 0 72  
構成比/% 0.0 2.8 0.0 4.2 12.5 25.0 33.3 15.3 5.6 1.4 0.0 0.0 100.0

表2 三水區2014年麻疹疑似病例年齡分布

 

年齡 <8 月 8 月~2歲 3~10歲 11~20歲 21~30歲 31~40歲 >40歲 合計
病例數/n 18 13 4 5 21 20 7 88
陽性數/n 17 11 3 1 17 19 4 72
陽性率/% 94.44 84.62 75.00 20.00 80.95 95.00 57.14 81.81

表3 不同出疹天數采集樣品檢測情況      (n)

 

采樣距出
疹時間
血清IgM抗體檢測 鼻咽拭子核酸檢測  
病例數 陽性數 陽性率/% 病例數 陽性數 陽性率/%
<3 d 17 7 41.18 26 23 88.46
3~6 d 63 50 79.36 47 41 87.23
>6 d 5 4 80.00 7 6 85.71
合計 85 61 71.76 80 70 87.50

2.6 免疫史與麻疹陽性率之間的關系
     88例疑似病例中,無免疫史的麻疹陽性檢出率最高,達9643%;免疫史不詳的陽性例數最多,一共檢出42例,占5833%,詳見表4。三者檢測陽性率差異具有統計學意義(2=11397,P=0003)。

表4 麻疹陽性病例接種史情況   (n)

 

  病例數 陽性數 陽性率/%
有免疫史 7 3 42.86
無免疫史 28 27 96.43
不詳 53 42 79.25
合計 88 72 81.81

3 討論
     麻疹減毒活疫苗普遍應用多年后,其發病模式正在發生變化,輕型或不典型病例逐年增加[2],2013年以來我區周邊如南海區出現麻疹疫情反彈勢態,世界衛生組織西太平洋地區(WHO WPR)委員會把消除麻疹目標由2012年推遲到2015年[3]。為加大對麻疹疫情監控力度,盡早對麻疹疑似病例進行實驗室確診,及時阻斷麻疹病毒傳播,我區2014年加強了對麻疹疑似病例的監測工作,在傳統ELISA法檢測麻疹IgM抗體基礎上,同時進行熒光定量PCR檢測麻疹病毒核酸。
     根據《全國麻疹監測方案(2014版)》,目前對麻疹疑似病例的實驗室確診手段一般是通過ELISA法檢測麻疹特異性IgM抗體,ELISA法是基層麻疹監測網絡實驗室通用的檢測手段,但一些處于感染早期或免疫功能低下的患者體內麻疹IgM抗體滴度比較低,容易造成漏檢[4-5]。本研究發現,鼻咽拭子麻疹病毒核酸檢測陽性率(8750%)高于靜脈血IgM抗體檢測陽性率(7176%),二者差異具有統計學意義(P<005);不同采樣時間,麻疹鼻咽拭子核酸檢測陽性率差異沒有統計學意義(P>005),而麻疹IgM抗體陽性檢出率差異具有統計學意義(P<005)。因此,采血時間是影響麻疹IgM抗體檢測結果的主要因素。人體感染麻疹病毒后,血清中特異性IgM抗體在發病早期產生很少或不產生,1周后達高峰,隨后逐漸下降,至1個多月后消失[6],而患者臨床就診往往在發病初期,如果此時采血,很可能使測定結果未達到IgM抗體滴度分布高峰,從而出現假陰性。這與國內學者報道發病早期,IgM抗體產生較少或不產生,陽性率為50%~73%相一致[7-8]。本研究顯示,采血時間距出疹時間>3 d的麻疹IgM抗體檢出率明顯高于<3 d檢出率,同時在10例病例核酸檢測陽性但IgM抗體檢測陰性中有7例為出疹時間<3 d,表明麻疹病毒核酸PCR檢測是對血清學檢測的必要補充手段,因此對于出疹<3 d的疑似病例最好采集鼻咽拭子標本進行核酸檢測,避免出疹早期血清中麻疹IgM抗體滴度過低而造成漏檢。
     對麻疹陽性病例性別分布分析可知,男女在統計學上不存在差異(P>005),可知在人群易感性方面,沒有性別差異,與袁丁[9]報道的以男性為主不一致,可能存在地域差異。從發病年齡來看,我區麻疹發病呈典型向低齡化(0~2歲)和成年化(21~40歲)雙向位移,這與既往報道的基本一致[10-11]。根據發達國家的經驗,隨著消除麻疹工作的深入,麻疹發病年齡會向<1歲和成人病例轉移[12]。低齡化發病主要原因與嬰兒母體胎傳抗體水平較低和未能及時接種麻疹疫苗有關,建議在提高基礎免疫質量的前提下,將麻疹初免年齡適當提前,并在申請結婚育齡婦女中進行麻疹疫苗復種,提高母傳麻疹抗體水平。此外,醫院暴露是小月齡(<8月)兒童發生麻疹的唯一危險因素[13],該年齡段的兒童未達到初免年齡,因此只有提高其他人群的免疫水平,建立免疫屏障,減少這部分兒童暴露麻疹的機會,進而減低<8個月齡兒童發病。同時應當加強醫院內感染控制,防止因醫院就診感染麻疹。
     20~40歲年齡組免疫史均不詳,這部分人發病主要原因可能跟免疫空白和體內抗體隨接種年限的增加不斷下降有關[14-16]。由于他們接種麻疹疫苗的日期比較久遠,體內抗體水平已明顯下降,極易感染病毒而致病。因而,在做好小年齡組計劃免疫的同時,大年齡組也應給予更多的關注,必要時可將該年齡組人群列為麻疹免疫接種對象,進行應急接種。
     本轄區2014年除1、3、11、12月沒有麻疹病例,其他各月均有散發病例,但具有明顯的季節性,主要集中在5~8月,7月達最高峰,占全年總病例數3333%。這與以往呼吸道傳染病冬春為高發[17]的傳統規律相比有明顯的改變。由此提示,夏季也應該做好麻疹的防控工作,一旦發現疫情要及時處理,出現麻疹病例后,立即對周圍易感者進行應急接種,以控制疫情,避免二代病人的出現[18-19]。我區位于珠三角西北端,外來人口較多,流動性大,麻疹疫苗接種規范管理有一定的難度,調查顯示居住在本轄區外的人口麻疹陽性檢出率明顯高于居住在本區內的人口,二者差異具有統計學意義(P<005)。所有無免疫史的陽性病例中,外地人口占7037%(19/27);免疫史不詳的陽性病例中,外地人口占6904%(29/42)。因此無免疫史及免疫史不詳是外地人口麻疹發病的主要原因,這表明常規免疫工作仍需進一步加強,同時應加強與流動人口管理部門的合作,盡早將流動兒童納入到常規管理,減少并盡可能消除這部分人群的免疫空白。分析認為在免疫史不詳的病例中一部分有接種史,但由于疏忽管理,接種卡(證)丟失而無據可查,故應規范基層免疫規劃管理工作,健全基礎資料,做到有證可循[20]。
     針對我區麻疹流行病形式及特征,為將麻疹控制在更低水平,應做好以下工作:加大監測力度,同時加強實驗室建設,提高麻疹實驗室檢測水平。加強對流動人口的管理,落實基礎免疫和加強常規免疫,維持適齡兒童疫苗接種率在較高水平前提下提高接種質量,提高人群的免疫覆蓋率,定期對人群包括育齡期婦女抗體水平和免疫成功率的監測,來提高整體人群的抗體水平。

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(下轉第149頁)(上接第146頁)
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